Cultivo in vitro mediante embriogénesis somática y transformación genética de maíz (Zea mays L.) con genes de biosíntesis de threhalosa
Cultivo in vitro mediante embriogénesis somática y transformación genética de maíz (Zea mays L.) con genes de biosíntesis de threhalosa
Date
2014-06-30
Authors
Martínez Cruz, Esbeydi
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidad Autónoma Chapingo
Abstract
En México y en el mundo la sequía es el principal factor
ambiental que genera enormes pérdidas en las
cosechas. El principal objetivo de esta investigación fue
obtener plantas transgénicas de maíz que acumulen
trehalosa, con mayor tolerancia al estrés abiótico. Para
lograr el objetivo, se utilizó la línea de maíz CML72, la
cual había sido anteriormente probada para obtención
de callo embriogénico a partir de embriones inmaduros.
En primer lugar se evaluó la capacidad regenerativa de
la línea CML72 utilizando como explantes no sólo
embriones inmaduros sino también embriones
maduros. Los resultados mostraron que puede
inducirse callo embriogénco tipo I en ambos tipos de
explantes de la línea CM72. En ambos casos el callo
obtenido puede ser regenerado de manera exitosa
hasta la obtención de plantas, sin embargo, las plantas
obtenidas presentan algunas anormalidades, entre las
que se destacan aquellas que tienen que ver con la
reproducción, como lo son la ausencia de inflorescencia
masculina en su mayoría y en algunos casos femenina.
En segundo lugar y para descartar que las variaciones
somaclonales tuvieran un origen genético, se realizaron
análisis con marcadores moleculares RAPDs los cuales
no detectaron polimorfismos durante los nueve meses
que duró el cultivo in vitro, esto fue confirmado al
sembrar la generación T1 y observar que el fenotipo
original fue recobrado. De lo anterior se concluye que
tanto embriones inmaduros como embriones maduros
son dos explantes aptos para generar callo
embriogénico. A partir de estos resultados previamente
descritos, se procedió a realizar la transformación
genética de callo embriogénico generado de embriones
maduros. Se utilizaron para la obtención de plantas
transgénicas tanto bombardeo como agroinfección con
dos genes quiméricos 35S::ScTPS1TPS2::NOS y
Rd29A::ScTPS1TPS2::NOS para biosíntesis de
trehalosa en el vector pGreen0229 ó pTF101.1. Se
obtuvieron y analizaron 10 líneas transgénicas. Algunas
de las líneas transgénicas mostraron mayor tolerancia
a sequía. Por lo tanto la línea CML72 puede ser
exitosamente utilizada en transformación genética con
éste y otros genes de interés.
Description
Tesis (Doctorado en Ciencias en Horticultura)