Evaluación de las respuestas embriogénicas en Cycas revoluta Thunb., a partir de cultivo de callos obtenidos in vitro

Abstract

Con la finalidad de establecer las condiciones in vitro que promuevan las principales respuestas morfogénicas asociadas a la obtención de embriones somáticos de Cycas revoluta Thunb., se planteó el desarrollo de un protocolo alternativo a la propagación y conservación, así como para el estudio futuro en dicha especie; se sometieron callos amorfos obtenidos de megagametofitos a cuatro combinaciones del medio MS bajo condiciones asépticas, la oscuridad y temperaturas, observando el efecto de 2,4-D, picloram, BA y kin; se evaluaron niveles de diferenciación celular, el necrosamiento, su consistencia, color además se cuantifico el número de estructuras proembrionarias en dicha etapa, así como el incremento mensual de masa y volumen. Los callos potencialmente embriogénicos fueron subcultivados en MS diluyendo en un 75% de KNO3 y 25% de NH4NO3, observando el desarrollo y maduración de embriones somáticos bajo el efecto de ABA en 0, 0.38, 1.13, 3.78 y 5.67 µM, los embriones maduros independientes al tejido calloso, fueron subcultivados en MS para diagnosticar el efecto de BA, 2,4-D, ANA, y AG3 en el porcentaje de germinación. Se realizaron análisis histológicos para evidenciar los procesos celulares desencadenados en cada una de las etapas de ES. La combinación de 1.36 µM 2,4-D + 4.44 µM BA en MS con la fuente de nitratos al 50% originó callos potencialmente embriogénicos a los 170 dds, capaces de generar embriones en un medio sin la presencia de reguladores de crecimiento a partir de los 10 dds; no obstante, su maduración completa se presentó a los 125 dds. Por lo que la combinación de 1.36 µM 2,4-D + 4.44 µM BA estimularon en un 90% respuestas significativas asociadas al desarrollo y germinación. La presencia de grupos de células de tamaño mínimo, citoplasma denso y núcleo prominente, son características que definieron a los callos potencialmente embriogénicos.