Inducción in vitro de brotes y callos en aguacate (Persea americana Mill.)

Abstract

Los principales cultivares de aguacate (Persea americana Mill.) que se comercializan hoy en día son resultado de los esfuerzos de mejoramiento genético convencional que se vienen realizando desde los años 50, el cual es un proceso largo y laborioso. La biotecnología moderna y el cultivo in vitro son herramientas clave para el mejoramiento genético de las especies cuyo éxito recae en el desarrollo de protocolos de regeneración eficientes, ya sea por organogénesis o por embriogénesis somática. Sin embargo, a pesar de que durante los últimos 50 años se vienen realizando esfuerzos por estandarizar estos protocolos en aguacate, existen todavía bastantes limitaciones para el establecimiento in vitro de la especie. Dentro de estas destacan la amplia diversidad de respuestas morfogénicas que son dependientes del genotipo y que obligan a la estandarización de protocolos específicos para cada variedad; además de las bajas tasas de regeneración de plantas completas que se han obtenido hasta ahora, tanto por embriogénesis somática (utilizando embriones cigóticos inmaduros) como por organogénesis (a partir de yemas axilares), lo que a su vez ha limitado el desarrollo de protocolos de transformación genética para estudios de mejoramiento genético ya que dependen de un sistema de regeneración in vitro eficiente. Con el presente estudio se pretende contribuir al desarrollo de protocolos de regeneración y transformación genética en aguacate. Las plantas madre utilizadas inicialmente como fuente deexplantes fueron árboles adultos cvs. Duke 7 y Hass; sin embargo, se presentaron severos problemas de contaminación y necrosamiento que limitaron el establecimiento in vitro de los explantes. Por lo tanto, se optó por utilizar plantas jóvenes de Duke 7 y var. drymifolia, lo cual permitió establecer un protocolo de desinfección eficiente con un promedio de viabilidad de los explantes del 90 %. Se realizaron diferentes experimentos para la inducción de respuestas morfogénicas. La inducción de callos se evaluó utilizando 0.1 y 0.2 mg/L de picloram; ambos tratamientos generaron callo, sin embargo, el nivel de inducción fue superior con 0.1mg/L, mientras que con 0.2 mg/L se obtuvo un mayor porcentaje de explantes con callo. En cuanto a la inducción de brotes, se logró una inducción del 68 % con una longitud promedio de 1.5 cm a los 45 días de cultivo, aunque no se observó multiplicación de brotes en la var. drymifolia. En el caso de ‘Duke 7’ las respuestas morfogénicas fueron bastante reducidas a pesar de utilizar plantas etioladas. De igual manera, el establecimiento de embriones cigóticos obtenidos de frutos inmaduros de las variedades Hass, Thomas y var. drymifolia en un medio de inducción y mantenimiento de embriones suplementado con 0.2 mg/L de picloram resultó en una abundante formación de callo, aunque no se desarrollaron estructuras embrionarias. También se realizó un ensayo preliminar de agroinfección mediante sonicación y vacío utilizando el vector binario p35GUSint en explantes nodales de la variedad Duke 7, en donde a los 17 días del cultivo inicial y 6 días de co-cultivo con la cepa EHA105, se observaron niveles claramente visibles de expresión del gen GUSint.