Estandarización de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección de las bacterias cuarentenadas Xylella fastidiosa Wills et al., y Ralstonia solanacearum r3

Abstract

Xylella fastidiosa y Ralstonia solanacearum r3 son bacterias cuarentenadas para México que causan Ia enfermedad de Pierce en vid y Ia marchitez bacteriana en papa, respectivamente. Estas bacterias requieren una detección rápida y confiable para evitar su introducción o diseminación en el país. Como una alternativa a los métodos tradicionales en Ia detección o confirmación de Ia presencia de estas bacterias en México, en este trabajo se estandarizaron los protocolos para su detección mediante PCR utilizando los iniciadores específicos previamente reportados por Minisavage et al., (1994) para el caso de X. fastidiosa y Seal et al., 1992) para R. solanacearum r3. Se evaluaron los métodos de extracción de ADN Plant- DNA-zol, Núcleo Spin plant, CTAB, Dellaporta y Minisavage a partir de bacterias en cultivo y tejido vegetal infectado; además, de las condiciones de Ia PCR. Se logró Ia extracción de ADN y estandarización de los protocolos, amplificando para Ralstonia solanacearum r3 un fragmento de 100 pb con los primers T3A:T5A y un fragmento de 733 pb para Xylella fastidiosa con los primers RST31 :RST33; sin embargo, no fue posible eliminar los inhibidores del ADN de esta última bacteria purificada a partir de tejido infectado de vid , con los métodos utilizados para esto.