Técnicas moleculares para detectar el agente casual de la enfermedad HLB en cítricos de la huasteca hidalguense

Abstract

El Huanglongbing (HLB) es considerada como una de las enfermedades más importantes en la citricultura mundial. Se han asociado cuatro agentes causales Candidatus Liberibacter asiáticus, Candidatus Liberibacter africanus, Candidatus Liberibacter americanus y Candidatus Fitoplasma asteris. En el presente estudio se evaluaron muestras vegetales (Citrus reticulata, Citrus limeta Risso, Citrus sinensis, Citrus latifolia Tanaka, Citrus aurantifolia (Chrism) y Citrus paradisi Macf.) y psílidos de los diez municipios que conforman la Huasteca Hidalguense para la identificación molecular del agente causal del HLB. Las muestras se analizaron por medio de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) amplificando la región 16S de DNAr con los primers específicos A2/J5 para Ca. Liberibacter y los primers universales R16F0/R16R0, además PCR y PCR anidada con los primers P1/P7 y fU5/rU3 respectivamente para fitoplasmas. Los amplicones fueron digeridos con las enzimas de restricción HaeIII, HhaI y HinfI para obtener RFLPs. Los resultados mostraron en promedio tres bandas como productos de digestión y fueron seleccionadas por su peso molecular. La secuenciación de los fragmentos obtenidos no permitió asociar o hacer homologías de parentesco con alguna de las especies asociadas al HLB de los cítricos. La utilización de primers de otras regiones genómicas específicas de Ca. Liberibacter son necesarias en futuras investigaciones que aporten información contundente sobre si los síntomas que se presentan en cítricos corresponden a la presencia de Ca. Liberibacter asiaticus Ca. Fitoplasmas o a otro agente causal. Los resultados negativos en la detección de Candidatus Liberibater asiaticus pueden deberse a que los síntomas no fueron ocasionados por la bacteria o a la falta de sensibilidad de la técnica de PCR tiempo final. Este estudio sugiere con base en los resultados obtenidos, que el análisis se realice con TR-PCR para la detección de los patógenos asociados a HLB, o metagenómica, que son técnicas altamente sensibles y que pueden dilucidar este complejo problema que ha mostrado resultados similares en otras investigaciones.