Regeneración in vitro y ensayos de transformación genética a partir de embriones inmaduros de líneas de maíz de Valles Altos de México

Abstract

Un requisito indispensable para la aplicación de las técnicas de transformación genética, es la disponibilidad de un procedimiento de regeneración in vitro eficiente y reproducible. El objetivo de la presente investigación fue determinar dichos protocolos en 10 líneas de maíz azul y 20 líneas de maíz blanco provenientes del Programa de Mejoramiento Genético de Maíz del Departamento de fitotecnia de la Universidad Autónoma Chapingo, en términos de capacidad de regeneración por embriogénesis somática de embriones inmaduros y eficiencia de transformación. Para ello se probaron dos medios de cultivo para la inducción de embriogénesis el N6C1SN y el MSE3, y la inducción de brotes se hizo en medio MS suplementado con AIA (0.5 mg.L-1) y BAP (1 mg.L'1) . Adicionalmente fueron hechos algunos ensayos de transformación por el método de agroinfección. Los componentes del medio no influyeron en la formación de callo embriogénico, en las características físicas de los callos ni en la regeneración de plantas. Se identificaron dos líneas de maíz (ChAzE5 y ChB1103) que dieron resultados aceptables de regeneración aunque no tuvo asociación con la producción de callo embriogénico. No hubo éxito en la obtención transformantes verdaderos bajo selección con fosfonitricina y kanamicina comprobado mediante PCR. El potencial de formación de callo embriogénico y la regeneración in vitro tuvo una respuesta favorable y diferencial dependiendo de los genotipos evaluados. Es necesario determinar la presión de selección con el agente selectivo y aumentar la eficiencia de la agroinfección usando el gen reportero GUSint antes de llevar a cabo nuevos ensayos para obtener transformantes estables verdaderos. Key words: Embryogenesis, regeneration maize, transformation.