Crioconservación y estabilidad genética de ápices de plantas transgénicas de crisantemo (Dendranthema grandiflorum Kitam.) que acumulan trehalosa

Abstract

Se puede incrementar la acumulación endógena de trehalosa y la tolerancia al congelamiento al sobre expresar los genes de biosíntesis de este azúcar en plantas genéticamente modificadas. Este trabajo muestra la mayor tolerancia a la crioconservación por vitrificación de dos líneas de plantas transgénicas de crisantemo (Dendranthema grandiflorum Kitam) que acumulan trehalosa, en comparación con plantas no transformadas de la misma variedad Indianapolis. Para la crioconservación se extrajeron ápices de plantas cultivadas in vitro y se precultivaron por 1-7 días en medio MS con sacarosa 0.3 M, trehalosa 0.3 M o la combinación de ambas (0.15 M c/u), seguido por tratamiento con una solución de sacarosa 0.4 M + glicerol 2 M por 20 min y después expuestos por 0-60 minutos a soluciones de verificación PVS2 PVS3 a temperatura ambiente para finalmente sumergir los tejidos en nitrógeno líquido. La regeneración más alta después de la crioconservación se obtuvo con el material transgénico precultivado en sacarosa 0.15 M por + trehalosa 0.15 M durante 4 días, seguido por el tratamiento en cualquier solución PVS por 40 minutos. Los ápices crioconservados de las dos líneas transgénicas probadas produjeron 63 % y 71 % de regenerantes con PVS3 por 40 minutos, mientras que la no transgénica mostró 45 % de regeneración con PVS3 y 38 % con PVS2 por 40 minutos De las plantas regenerantes se analizó su estabilidad genética mediante RAPD. No se detectaron locus polimórficos en las plantas + trehalosa 0.15 M durante 4 días, seguido por el tratamiento en cualquier solución PVS crioconservadas usando 8 iniciadores con los que se amplificaron un total de 98 loci. Estos resultados muestran que la crioconservación usando vitrificación estable, y que la acumulación endógena de trehalosa en células y tejidos vegetales puede mejorar la tolerancia a la temperatura ultra-baja del nitrógeno líquido.