Identificación y selección de plantas transgénicas T1 de jitomate (Solanum lycopersicum L.) con capacidad de acomular trehalosa

Abstract

Durante la generación de líneas de plantas transgénicas es necesario detectar a los individuos transformados hasta la generación T2, para seleccionar las plantas que conservan el gen con la característica de interés y descartar a aquellas que no la posean, como resultado de la segregación originada en el auto cruzamiento de los transformantes originales (T0). El objetivo del presente trabajo fue identificar y seleccionar plantas de jitomate T1 con la construcción ScTPS1-TPS2 que confiere capacidad de acumular trehalosa, mediante la amplificación del gen BAR o NPTII, a partir de plantas previamente identificadas como transformantes obtenidas con los vectores binarios pBIN y pTF101.1. Sólo se detectaron siete plantas T1 provenientes de 3 eventos independientes T0. Habrá que llevar a cabo otros experimentos para determinar si la detección por PCR está dando muchos falsos negativos o si realmente hubo pocos eventos positivos (o muchos falsos positivos) desde T0. Cabe mencionar dentro de los estudios de biología molecular ejecutados, un elemento muy importante es la extracción del ADN, porque un método optimizado para purificarlo, permite aprovechar tiempo y recursos. Por esta razón se propusieron y evaluaron protocolos de extracción sin nitrógeno líquido (NL), modificando la metodología en la que se utiliza NL. Los métodos analizados fueron: a) sin NL y sin eliminación de ARN; b) sin NL y con eliminación de ARN con cloruro de litio; c) sin NL y con ARNasa para eliminar ARN. Los tres métodos se compararon con otros dos: d) con NL y con ARNasa para eliminar el ARN, y e) con NL y sin ARNasa. La cantidad y pureza de ADN obtenido fue similar en los cinco casos como se vio al analizar los extractos mediante electroforesis en geles de agarosa y al utilizarlos para reacciones de amplificación por PCR.