Regeneración por embriogénesis somática y agroinfección de trigo (Triticum aestivum L.)

Abstract

El trigo es uno de los cultivos alimenticios más importantes en el mundo. En México es el tercer grano cultivado de importancia. En el futuro habrá que incrementar la producción de esta gramínea para satisfacer una mayor demanda y para enfrentar los efectos del cambio climático. Para este fin, la biotecnología proporciona un conjunto de herramientas como el mejoramiento genómico, la ingeniería genética y más recientemente la edición genética. La ingeniería genética para la generación de plantas transgénicas requiere de protocolos eficientes de regeneración mediante el cultivo in vitro, como pre-requisito para el proceso de transformación genética. En este trabajo se desarrollaron protocolos para la regeneración eficiente de dos variedades de trigo (Rebeca F2000 y Kronstad F2004) mediante embriogenésis somática inducida a partir de embriones maduros. La inducción de callo embriogénico se obtuvo en un medio MS con vitaminas Gamborg (MSG) o vitaminas MS (MSMS) con 0.5 mg L-1 de 2-4D y 2.4 mg L-1 de Picloram, bajo incubación en obscuridad por cinco semanas. La brotación de los embriones, se logró en medio MSG con 0.2 mg L-1 de 2-4D y 1.0 mgL-1 Tidiazurón para la variedad Rebeca F2000, obteniendo hasta 14.8 brotes por explante en promedio, mientras que para la variedad Kronstad se empleó el medio MSMS con 0.2 mg L-1 2-4D y 2.0 mgL-1 Tidiazuron, logrando hasta 8.4 brotes por explante. La brotación se llevó a cabo bajo fotoperíodo de 16 horas de luz y 8 de obscuridad y los brotes se obtuvieron en dos semanas. El enraizamiento y la adaptación ex vitro también pudo lograrse de manera eficiente. Se determinó la cantidad de agente selectivo (sorbitol, NaCl, kanamicina y fosfinotricina) a emplear durante la transformación para ambas variedades, así como la mayor infectividad de la cepa EHA105 (pGUSint) sobre la GV3101(pGUSint) y la LBA4404 (pGUSint) en la variedad Kronstad.