Técnicas moleculares para detectar el agente casual de la enfermedad HLB en cítricos de la huasteca hidalguense
Técnicas moleculares para detectar el agente casual de la enfermedad HLB en cítricos de la huasteca hidalguense
Date
2018-06
Authors
Espinoza Sánchez, Christiam
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Universidad Autónoma Chapingo
Abstract
El Huanglongbing (HLB) es considerada
como una de las enfermedades más importantes en
la citricultura mundial. Se han asociado cuatro
agentes causales Candidatus Liberibacter asiáticus,
Candidatus Liberibacter africanus, Candidatus
Liberibacter americanus y Candidatus Fitoplasma
asteris. En el presente estudio se evaluaron
muestras vegetales (Citrus reticulata, Citrus limeta
Risso, Citrus sinensis, Citrus latifolia Tanaka, Citrus
aurantifolia (Chrism) y Citrus paradisi Macf.) y
psílidos de los diez municipios que conforman la
Huasteca Hidalguense para la identificación
molecular del agente causal del HLB. Las muestras
se analizaron por medio de la Reacción en Cadena
de la Polimerasa (PCR) amplificando la región 16S
de DNAr con los primers específicos A2/J5 para Ca.
Liberibacter y los primers universales R16F0/R16R0,
además PCR y PCR anidada con los primers P1/P7
y fU5/rU3 respectivamente para fitoplasmas. Los
amplicones fueron digeridos con las enzimas de
restricción HaeIII, HhaI y HinfI para obtener RFLPs.
Los resultados mostraron en promedio tres bandas
como productos de digestión y fueron seleccionadas
por su peso molecular. La secuenciación de los
fragmentos obtenidos no permitió asociar o hacer
homologías de parentesco con alguna de las
especies asociadas al HLB de los cítricos. La
utilización de primers de otras regiones genómicas
específicas de Ca. Liberibacter son necesarias en
futuras investigaciones que aporten información
contundente sobre si los síntomas que se presentan
en cítricos corresponden a la presencia de Ca.
Liberibacter asiaticus Ca. Fitoplasmas o a otro
agente causal. Los resultados negativos en la
detección de Candidatus Liberibater asiaticus
pueden deberse a que los síntomas no fueron
ocasionados por la bacteria o a la falta de
sensibilidad de la técnica de PCR tiempo final. Este
estudio sugiere con base en los resultados
obtenidos, que el análisis se realice con TR-PCR
para la detección de los patógenos asociados a HLB,
o metagenómica, que son técnicas altamente
sensibles y que pueden dilucidar este complejo
problema que ha mostrado resultados similares en
otras investigaciones.
Description
Tesis (Maestría en Ciencias en Protección Vegetal)